類人猿免疫球蛋白G4(IgG4)ELISA操作步驟:

產(chǎn)品名稱: 類人猿免疫球蛋白G4(IgG4)ELISA檢測(cè)試劑盒

規(guī)格:96T/48T

保存;2-8℃。

檢測(cè)目的:用于檢測(cè)血漿,血清及相關(guān)液體等樣本。例如灌洗液、腦脊液、血清、血漿、尿液、胸腹水、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本.

檢測(cè)種屬:大鼠、小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、等動(dòng)植物。

試劑盒組成及試劑配制 :

1.酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。

3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶

4. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。

6. 生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)

8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

樣品收集、處理及保存方法:

1)血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3)細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液

5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟:

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3。

8. 洗滌:操作同 5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。

11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

使用注意事項(xiàng):

1. 試劑盒使用前請(qǐng)保存在2-8℃。復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品若未用完,請(qǐng)廢棄。

2. 微量試劑運(yùn)輸中顛簸和可能的倒置,會(huì)使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請(qǐng)1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘,以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。

3. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?，F(xiàn)象,微加熱至40℃使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液。

(加熱溫度不要超過50℃)使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫。

4. 不同批號(hào)的試劑盒組份避免混用(洗滌液和反應(yīng)終止液除外)。

5. 充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要,使用微量振蕩器(使用zui低頻率),如無微量振蕩器,可在反應(yīng)孵育前手工輕輕混勻。

6. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測(cè)時(shí)建議作雙孔檢測(cè)。

7. 試驗(yàn)中所用的試管和吸頭均為一次性使用,嚴(yán)禁在不同的液體之間混用!否則將影響試驗(yàn)結(jié)果。

8. 試驗(yàn)中請(qǐng)穿著試驗(yàn)服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作。特別是檢測(cè)血液或者其他體液標(biāo)本時(shí),請(qǐng)按國(guó)家生物試驗(yàn)室安全防護(hù)條列執(zhí)行。