細(xì)胞研究不可或缺的細(xì)胞體積分析
生物、藥物等許多的研究均需要通過(guò)觀察細(xì)胞體積的變化或細(xì)胞數(shù)目增減的來(lái)判斷和評(píng)估實(shí)驗(yàn)的效果。由于細(xì)胞所處環(huán)境的改變可促使其自身體積做出相應(yīng)的變化,以便適應(yīng)改變后的環(huán)境大致新的平衡。由于并不能清晰地知道該種細(xì)胞體積變化規(guī)律,因此必須檢測(cè)其體積或細(xì)胞數(shù)目隨條件、時(shí)間的變化。
細(xì)胞的發(fā)育與細(xì)胞分裂周期級(jí)數(shù)遞增均需要連續(xù)不斷的細(xì)胞增殖。
在培養(yǎng)液中正在增殖的細(xì)胞在其分裂前其體積將增大至原體積的兩倍。然而對(duì)細(xì)胞發(fā)育與分裂的速度作如何調(diào)整才能保證細(xì)胞體積的不變并不明確。因此,測(cè)量細(xì)胞的體積的變化對(duì)了解與控制細(xì)胞的發(fā)育和周期非常重要。
細(xì)胞的死亡
細(xì)胞的增殖與細(xì)胞的死亡之間需要一個(gè)精細(xì)的平衡以保持足夠的細(xì)胞數(shù)量。該種平衡容許細(xì)胞作*的狀態(tài)調(diào)節(jié)以適應(yīng)各樣機(jī)能變化的需求。細(xì)胞死亡有兩種清晰的機(jī)制,壞死與凋亡。壞死是一個(gè)病理生理的機(jī)制,包括細(xì)胞膨脹以及細(xì)胞膜破裂而釋出內(nèi)容物。凋亡則是一個(gè)程序式死亡的機(jī)制。凋亡的特征之一就是細(xì)胞收縮。細(xì)胞有缺陷的凋亡與過(guò)度凋亡,兩者同樣會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重疾病。
滲透壓的補(bǔ)償
任何種類的細(xì)胞都有可能因處于不利環(huán)境而死亡。細(xì)胞猶如多孔的網(wǎng)篩極易因滲入已溶解于周圍環(huán)境的化學(xué)物而使?jié)B透壓受影響。細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境中該些溶解物顆粒數(shù)目的不平衡,將會(huì)導(dǎo)致水份透進(jìn)細(xì)胞而使其體積漲大,或者是水份從細(xì)胞滲出使其體積收縮。
當(dāng)細(xì)胞或微生物遭遇環(huán)境的變化,它們都會(huì)嘗試通過(guò)自身調(diào)節(jié)來(lái)適應(yīng)新的環(huán)境。
細(xì)胞平均體積(MCV)的變化
當(dāng)細(xì)胞或微生物遭受環(huán)境變化時(shí),它們將通過(guò)自身調(diào)整以圖適應(yīng)新的環(huán)境。一些例子中細(xì)胞需要改變自身體積以便達(dá)到適合的目標(biāo)。
由貝克曼庫(kù)爾特公司出品的Multisizer 3 庫(kù)爾特細(xì)胞特性分析儀是目前zui的細(xì)胞體積、細(xì)胞計(jì)數(shù)的分析儀器,應(yīng)用文獻(xiàn)多不勝數(shù)。無(wú)可逾越的技術(shù)更使Multisizer 3 成為分辨率zui高的儀器。國(guó)外的用戶統(tǒng)計(jì)表明,Multisizer 3 已成為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室*的研究工具。,
自*•庫(kù)爾特發(fā)明 庫(kù)爾特原理 以來(lái),該原理已廣泛應(yīng)用于材料、生物、醫(yī)學(xué)、制藥等眾多的領(lǐng)域。目前生物領(lǐng)域的細(xì)胞計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)就是庫(kù)爾特原理。美國(guó)材料實(shí)驗(yàn)協(xié)會(huì)ASTM將庫(kù)爾特原理定為生物細(xì)胞計(jì)數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)(ASTM-F2194)。血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)亦庫(kù)爾特原理為計(jì)算紅細(xì)胞與白細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室方法 (Clin. lab. Haemat. 1988. 10,203-212.)。
作為庫(kù)爾特原理及技術(shù)應(yīng)用的*,美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司始終保持著技術(shù)的優(yōu)勢(shì)。†庫(kù)爾特計(jì)數(shù)儀(Coulter Counter)無(wú)論在研究還是在質(zhì)量控制的應(yīng)用均具有深遠(yuǎn)的影響力。在的研究機(jī)構(gòu)及其發(fā)表的學(xué)術(shù)文獻(xiàn)當(dāng)中,庫(kù)爾特計(jì)數(shù)儀均擔(dān)當(dāng)著不可或缺的角色。
多年來(lái)貝克曼庫(kù)爾特公司在市場(chǎng)上推出了一系列的庫(kù)爾特計(jì)數(shù)儀(Coulter Counter),如:ZM、TA II、Multisizer II等系列型號(hào),為科研與產(chǎn)品控制的實(shí)驗(yàn)室顆粒/細(xì)胞的檢測(cè)提供zui可靠的分析手段。Multisizer 3 型庫(kù)爾特顆粒/細(xì)胞計(jì)數(shù)及粒度分析儀為當(dāng)今所有計(jì)數(shù)儀、粒度分析儀當(dāng)中分辨率zui高的儀器。
庫(kù)爾特原理(Coulter Principle)
又稱為電感應(yīng)區(qū)技術(shù)。
懸浮于弱電解液中的細(xì)胞被抽吸而經(jīng)過(guò)一個(gè)小孔,因產(chǎn)生外加電壓而形成“感應(yīng)區(qū)”。細(xì)胞經(jīng)過(guò)小孔時(shí),細(xì)胞的體積替代了電解液的相應(yīng)體積。因相應(yīng)體積的電解液被替代,小孔感應(yīng)區(qū)產(chǎn)生電壓脈沖而導(dǎo)致電阻的改變。脈沖的強(qiáng)度與細(xì)胞的體積成比例的關(guān)系。
Multisizer 3 先進(jìn)的DPP 數(shù)碼脈沖處理器,使測(cè)量過(guò)程中的數(shù)以百萬(wàn)計(jì)的脈沖信號(hào)無(wú)須經(jīng)壓縮而保存。數(shù)據(jù)因無(wú)損失而能實(shí)現(xiàn)再分析功能。DPP的功能使得Multisizer 3能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)樣品在分析過(guò)程中的原始變化。。
DPP同樣可用于檢測(cè)細(xì)胞體積的改變。在許多的生化過(guò)程中細(xì)胞體積是一個(gè)重要的參考因素。如細(xì)胞發(fā)育、細(xì)胞周期、細(xì)胞死亡、滲透壓的補(bǔ)償、致病機(jī)理和吞噬作用等。Multisizer 3 可以觀測(cè)細(xì)胞粒徑與體積從幾秒到幾小時(shí)內(nèi)的變化。。
DPP技術(shù)在低溫生物學(xué)中的應(yīng)用
這是在冷凍過(guò)程中受滲透壓影響的細(xì)胞,其平均體積(MCV)的分布曲線和20秒內(nèi)連續(xù)的脈沖峰值平均值的變化。
擇任意的脈沖群可以將一個(gè)粒度分布“分割”成多重的分布。因此,可獲得在分析全程中的某一時(shí)段的粒度分布。如圖示,可獲得細(xì)胞的平均直徑隨時(shí)間的變化。
使用Beckman Coulter 的Multisizer™ 3 庫(kù)爾特體積粒度分析儀將能方便而地測(cè)量細(xì)胞平均體積(MCV)的各種變化。